QUY TRÌNH NUÔI CẤY MÔ ALOCASIA LONGILOBA

Quy trình :

Mẫu ban đầu : 

Thu hái quả A.longoliba và rửa dưới vòi nước chảy, sau đó rửa lại bằng nước cất vô trùng để loại bỏ hoàn toàn bụi bẩn. Sau đó, tách hạt cẩn thận bằng tay và sấy khô ở nhiệt độ phòng trong hai tuần.

Khử trùng bề mặt hạt giống:

• Rửa hạt khô của A. longiloba dưới vòi nước chảy trong 30 phút.
• Khử trùng bề mặt hạt giống với nồng độ 40% Clorox (natri hypochlorite 5,25%) với vài giọt tween-20.
• Lắc hạt trên máy lắc với tốc độ 80 vòng/phút trong 20 phút.
• Rửa hạt đã khử trùng bằng nước cất vô trùng để loại bỏ một lượng Clo còn lại và sau đó thấm khô bằng giấy lọc đã khử trùng (90 mm).

Xử lý tiền nảy mầm:

Để phá vỡ trạng thái ngủ đông của hạt và tối đa hóa khả năng nảy mầm của hạt, hãy làm theo quy trình xử lý hạt giống:

• Hạt xử lý bằng axit sunfuric 30% (H2SO4) trong 15 phút và sau đó rửa sạch bằng nước cất trong 10 phút để loại bỏ vết dung dịch axit.
• Khử trùng bề mặt bằng Clorox 40% trong 20 phút và sau đó rửa bằng nước cất vô trùng ba lần, mỗi lần trong 1 phút.
• Nuôi cấy hạt trên môi trường gồm môi trường MS có bổ sung 30 g/l sucrose, 2,78 g/l agar không có chất điều hòa sinh trưởng thực vật.Điều chỉnh pH đến 5,7 ± 0,2 trước khi thêm agar và sau đó hấp khử trùng ở 121 °C ở 103 kPa trong 20 phút.
• Ủ các mẫu cấy ở 25 ± 2 °C với chế độ chiếu đèn 16/24 với đèn huỳnh quang trắng.

Cảm ứng và nhân chồi in vitro:

• Sử dụng hạt giống in vitro 4 tuần tuổi trong giai đoạn này.
• Cẩn thận loại bỏ lá mầm, phần dưới lá mầm và rễ.
• Cấy khoảng 2–3 cm đầu chồi vào môi trường MS có bổ sung cytokinin 6-benzyl amino purine (BAP)với nồng độ 3 mg/L.

Đối với cảm ứng mô sẹo:

• Xử lý hạt bằng axit sunfuric 30% trong 15 phút, sau đó khử trùng bề mặt bằng Clorox 40% trong 20 phút.
• Sau đó rửa mẫu bằng nước cất vô trùng để loại bỏ clo còn dính lại.
• Cấy các hạt đã khử trùng một cách vô trùng vào  môi trường (môi trường MS bổ sung 3 mg/L IAA) để tạo mô sẹo.
• Ủ các mẫu cấy ở 25 ± 2 °C với chế độ chiếu sáng 16/24h với đèn huỳnh quang trắng.

Đối với tạo rễ in vitro:

• Cấy các chồi riêng biệt (2–3 cm) từ nhiều mẫu cấy chồi vào môi trường MS bổ sung axit indole-3-acetic ở mức 0,5 mg/L, bổ sung 30 g/L sucrose và 8 g/L agar với chế độ chiếu sáng 16//24h.

Để thích nghi với khí hậu:

• Sau 4 tuần, cẩn thận lấy cây con đã mọc rễ (cao 8–9 cm) ra khỏi bình nuôi cấy và rửa kỹ bằng vòi nước chảy.
• Sau đó, rửa sạch rễ bằng nước để loại bỏ môi trường thạch.
• Giữ cây con trong phòng nuôi cấy có nhiệt độ 25 ± 2°C trong 5 này trước khi chuyển vào nhà lưới.
• Sau năm ngày, trồng cây con vào một chậu nhựa nhỏ có kích thước 20 × 15 cm giá thể có vể phối trộn đất và rêu than bùn theo tỷ lệ 1:2.

Chúc các bạn thành công !